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化妆品中雌三醇等7种禁用组分的测定
【发布时间】:2023/6/13 【点击次数】:3

本方案参照2015版《化妆品安全技术规范》中禁用组分检验方法2.4第法:高效液相色谱-紫外检测器/荧光检测器法,该法适用于化妆品中雌三醇等7种组分含量的测定。




一、方法原理

样品提取后,经高效液相色谱仪分离,紫外检测器检测,以保留时间定性,峰面积定量。


二、仪器和试剂

a. 高效液相色谱仪(上海仪电分析仪器有限公司LC220):配备紫外检测器;
b. 自动进样器(上海仪电分析仪器有限公司AS2000);
c. 色谱柱:C18柱,4.6 mm×250 mm,粒径为5 μm,或其他等效色谱柱;
d. 分析天平:感量为0.0001g;
e. 离心机:转速>3000r/min;
f. 超声波发生器;
g. 一般实验室常用仪器。
h. 甲醇
i 饱和氯化钠溶液
j. 环己烷
k. 硫酸[j(H2SO4)2%]:
取硫酸r201.84g/mL2mL,缓慢加入到98mL水中,混匀。


三、实验方法

3.1 标准系列的制备

3.1.1 **标准溶液 (或直接购买混标)

雌**标准溶液:分别称取雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚各0.2g(精确到0.0001g),用少量甲醇溶解,转移至100mL容量瓶中,用甲醇稀释到刻度。

雄**标准溶液:分别称取睾丸酮、甲基睾丸酮各0.6g(精确到0.0001g),用少量甲醇溶解,转移至100mL容量瓶中,用甲醇稀释到刻度,配制成含睾丸酮、甲基睾丸酮为6.00mg/mL的溶液。取此溶液 10.0mL置100mL容量瓶中,用甲醇稀释到刻度。

孕**标准溶液:称取黄体酮 0.6g(精确到 0.0001g),用少量甲醇溶解,转移至100mL容量瓶中,用甲醇稀释到刻度,配制成含孕**6.00mg/mL的溶液。取此溶液 10.0mL置于100mL容量瓶中,用甲醇稀释到刻度。

混合标准储备溶液:分别取雌**标准溶液50.00mL,雄**标准溶液5.00mL和孕**标准溶液5.00mL置于100mL容量瓶中,用甲醇稀释到刻度,配制成1mL分别含4种雌**各1.00mg、2种雄**各30.0μg和1种孕**30.0μg的混合标准储备溶液。


3.1.2 混合标准系列溶液的制备

取混合标准储备溶液0.00mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL于10mL具塞比色管中,用甲醇稀释至10mL刻度,制得混合标准系列溶液。




3.2 样品处理

溶液状样品:称取样品 1-2g精确到0.001g10mL具塞比色管中,在水浴上蒸除乙醇等挥发性有机溶剂,用甲醇稀释到10mL,作为样品待测溶液。

膏状、乳状样品:称取样品 1-2g精确到 0.001g100mL锥形瓶中,加入饱和氯化钠溶液50mL,硫酸2mL,振荡溶解,转移至100mL分液漏斗中,以环己烷30mL分三次萃取,必要时离心分离。合并环己烷层并在水浴上蒸除。用甲醇溶解残留物,转移到 10mL具塞比色管中,用甲醇稀释到刻度。混匀后,经0.45μm滤膜过滤,滤液作为样品待测溶液。